Mikroskopi av sporer, hyfer, cystidia, trama, for å identifisere sopp

Sammensatt mikroskop egnet for å studere sopp

Informasjonen nedenfor er et oppsummert utdrag fra Pat O'Reillys siste bok, 'Fascinated by Fungi' . For full informasjon og eksempelsider, se bokhandelen vår, hvor du kan bestille en forfatter-signert kopi online ... (Boken inneholder også en ordliste med mykologiske termer, og vi har en oppsummert versjon her for å hjelpe nybegynnere ...)

Mikroskopi og fotomikografi

Når du ikke kan identifisere en sopp i marken, kan det være lurt å ta med en prøve hjem for videre studier. Det nytter ikke å gjøre det med mindre det er noe du kan gjøre hjemme som du ikke kunne gjøre i felten. Mikroskopisk etterforskning er noe som gjøres best innendørs når du har nok tid til å gjøre ting ordentlig. Her er noen tips om valg og bruk av et mikroskop til dette formålet.

Lekemikroskop er greit for å se på dyre- og plantestrukturer, men for mykologi trenger du virkelig et godt mikroskop. Det er fordi de fine strukturene til sopp er veldig små - noen er nær grensen for hva som kan løses ved hjelp av lys. Røntgenbølgelengder er mye kortere enn for lysbølger, og så mye mer detaljer kan studeres ved hjelp av røntgenmikroskopi. Men hvis du tror at et optisk mikroskop er et dyrt verktøy for noe som for de fleste av oss bare er en hobby, bør du ikke engang vurdere å omforme huset ditt til et røntgenmikroskop fra bunnen av området.

Sporer av Lactarius azonites
Sporer av Lactarius azonites , sett via en oljedykkermikroskoplinse

For å studere soppsporer, basidier, cystidier, sphaerocyster og andre små trekk ved sopp, trenger du et mikroskop som kan forstørre minst x 400. Ideelt sett går du til et mikroskop med en maksimal forstørrelse på x 1000, men for å få rimelig klare bilder med så høy forstørrelse, bør det ha en oljedyplinse.

Dimensjoner og utsmykning (piggvorter, for eksempel - se bilde til venstre) av sporer er nøkkelidentifikasjonsegenskaper, og slik at du kan måle dimensjonene på ting du ser på, trenger du et okular som har et mikrometer i øynene eller noe annet kalibreringsmåter. Hvis du synes instruksjonene som følger med mikroskopet er forvirrende (eller hvis du er heldig nok til å plukke opp en bruktkjøp uten håndbok), vil noen i din lokale soppgruppe nesten helt sikkert være villige til å hjelpe deg med å sette opp og kalibrere system.

Mitt eget mikroskop er trinokulært, og kameraadapteren kan brukes, selv når jeg ser gjennom okularene. (Mye av tiden observerer jeg bare bildet som overføres til dataskjermen min.)

Andre `` må-ha '' mikroskopfunksjoner inkluderer:

  1. Justerbar belysning, ofte fra rett under lysbildet, og betegnet lysfeltbelysning. (For biologiske instrumenter er mørkfeltbelysning også nedenfra, men i en vinkel som sikrer at direkte lys ikke kommer inn i målet. Det krever enten en spesiell mørkfeltkondensator eller, for lav forstørrelse, et svart stopp satt inn i lysveien.)
  2. Kontrollknapper for å flytte det mekaniske trinnet som holder lysbildet
  3. Grove og fine fokuskontroller

Farging av kjemikalier

Sphaerocyster i stammestrukturen til Russula cyanoxantha, Charcoal Burner
Sphaerocyster i stammestrukturen til Russula cyanoxantha , en skogssopp , kjent som Charcoal Burner, er ansvarlig for sprøheten. Dette bildet ble tatt via et mikroskop med forstørrelse på x600. Stengelmaterialet på lysbildet ble farget med Congo Red.

Den fine strukturen i sporer og mange av de andre små delene av sopp som du vil se på under mikroskopet er nesten helt gjennomsiktig. De kan bare sees tydelig når de har blitt farget. Som et ytterligere hjelpemiddel til identifisering produserer mange sopper sporer som endrer farge når de er i kontakt med visse kjemikalier, referert til som reagenser (på grunn av reaksjonen når sporer kommer i kontakt med dem). Her er noen av kjemikaliene, flekkene og reagensene som ofte brukes i mykologisk mikroskopi:

Destillert vann

(Ja, god gammel H2O!) Hvis du vil se små motiver og se de naturlige fargene deres, er vann det ideelle fuktemidlet. Kranvann inneholder kjemiske tilsetningsstoffer som kan begrense levetiden til et lysbilde, og regnvann er surt og like problematisk, men destillert vann er billig og lett tilgjengelig. Du må kanskje legge til en dråpe fotografisk fuktemiddel for å unngå bildeforvrengning på grunn av små luftbobler festet til sporer eller annet motiv. (Oppvaskmiddel fungerer!) Tilsetning av ca. 10% glyserin vil sikre at lysbildene varer mye lenger før de tørker ut.

Ammoniakk (NH3)

Dette nyttige, men potensielt farlige kjemikaliet avgir en ekstremt skarp damp, og flasken må derfor være ordentlig lukket til enhver tid unntatt under bruk. (Husholdningens ammoniakk fra en hvilken som helst jernvarehandel er greit.) I tillegg til et reagens som forårsaker fargeforandring i noen typer sopp, er ammoniakk en komponent i visse andre reagenser. Ren ammoniakk er en gass ved normal romtemperatur, og for mykologisk bruk er en 10% løsning i destillert vann den normale konsentrasjonen. Det er sterkt, og hvis det kommer inn i øynene, vil det forårsake alvorlig skade.

Jernholdig sulfat (FeSO4)

Mange soppfan og mykologer bærer i sitt feltsett en krystall av jernholdig sulfat, kjent i det folket som jernsalter, for å gni på sopp (spesielt sprø fyll) for å se etter en farreaksjon. Ikke gå på bekostning av å kjøpe krystaller av farmasøytisk kvalitet; tingene som selges i hagesentre som en morder, og for å senke jordens alkalinitet er skitt billig (oops!) og fungerer like bra.

Kaliumhydroksid (KOH)

Dette brukes både som et monteringsmedium (vanligvis sammen med et fargekjemikalie) og som et reagens, enten i felt eller bak på basen. Lokk eller gjelleoverflater på noen sopper endrer farge dramatisk når de blir kontaktet av KOH; de kan for eksempel bli gule, røde, magenta, oliven eller svarte, avhengig av art. Så når du lager et mikroskop-lysbilde ved hjelp av KOH, er det ikke bare bevart mot forfall, men du kan også fremkalle en diagnostisk fargereaksjon som noen ganger kan bidra like mye til identifikasjonsprosessen som størrelses- og formdataene som er oppnådd via mikroskopet.

Melzers reagens

Denne cocktailen av kjemikalier er vanskelig å få tak i fordi en av de avgjørende komponentene er det potensielt farlige stoffet klorhydrat (et voldtektsmedisin). De andre komponentene er enkle å anskaffe - jodkrystaller, kaliumjodid og destillert vann. Jod reagerer med stivelsesholdige stoffer for å produsere en intens blå-svart farge, og soppsporer som inneholder stivelse blir referert til en 'amyloid'. Hvis du blir med i en soppgruppe i Storbritannia, kan du kanskje skaffe deg Melzers Reagent via Association of British Fungus Groups (ABFG). Sporer fra sopparter kan gjennomgå diagnostiske fargeendringer når de farges med Melzer's Reagent. Sporer kalles:

  1. Amyloid hvis de får en blå-svart farge.
  2. Dextrinoid hvis de får en rødbrun farge.
  3. Inamyloid (eller negativ) hvis de bare blir gule eller ikke endres i det hele tatt.

Disse begrepene brukes i feltguider som viser kjemiske testtegn for hver art.

Flekker

Asci av Poronia punctata
Asci of Poronia punctata , Nail Fungus

Hovedårsakene til å bruke flekker når du lager mikroskopsklier er å:

  1. forbedre kontrasten i et mikroskopisk bilde
  2. fremheve spesielle vevsstrukturer

Ofte brukes flekker sammen med andre kjemikalier som bidrar til å forhindre forfall eller uttørking av emnet.

Eksempler på fargestoffer inkluderer:

Kongo rød

En utmerket alminnelig flekk for å se på de fine detaljene til hyfestrukturer (se for eksempel Amanita rubescens gill tramabilde til høyre, der de markerte dimensjonene er i mikron.) Den leveres som pulver og oppløses best i 10% ammoniakkoppløsning.

Safranin

En annen flekk som produserer røde blodlegemer.

Lactophenol Cotton Blue

Dette flekker kitin, slik at strukturer som sporeutsmykning vises mye tydeligere enn de gjør med de fleste andre flekker (inkludert Kongo Red).

Et avskjedsskudd - vel, dette har mer å gjøre med å unngå avgang. Kjemikaliene nevnt ovenfor inkluderer noen alvorlig etsende, sure og giftige stoffer, og de må derfor oppbevares der barn ikke kan få tak i dem. Dampene fra ammoniakk kan for eksempel brenne øynene - faktisk krever noen tester bare ammoniakkdamp å passere over soppvev for å påkalle en fargeendring.

Trinokulært mikroskop

En sikker safe kan redde et liv. Jeg har en festet til veggen ved siden av benken der jeg oppbevarer mikroskopet mitt (se bildet over), og det er ideelt for oppbevaring av kjemikalier, barberblad, glassplater etc.

Sporer

Over: sporer av appelsinskall sopp Aleuria aurantia

Å lage lysbilder

De enkleste lysbildene å lage er av sporer. (Her vises sporer av Agaricus bisporus , den kommersielle knappesoppen som alltid er tilgjengelig i dagligvarebutikker og supermarkeder.) Alt du trenger å gjøre er å plassere soppen, den fruktbare siden nedover, på et objektglass og vente en time eller to.

I motsetning til når du prøver å lage en fin sporutskrift, trenger du ikke engang å dekke over alt, selv om jeg generelt gjør bare som en påminnelse om at det er et skarpt glassstykke under. Fordi du ønsker å være i stand til å se separate sporer i stedet for å bestemme fargen på sporene når du er stablet lag på lag, trenger du ikke en tett utskrift, så du må ikke la den være for lang.

Når du har litt sporestøv på lysbildet, tilsett en dråpe fuktemiddel (såpevann vil gjøre!) Eller en passende flekk hvis sporene er klare i stedet for fargede, og legg et dekkglass på toppen. Melzers reagens er et godt valg fordi samtidig som du forbedrer kontrasten, hvis du holder lysbildet opp mot lyset, vil du kunne se om sporene er amyloid, dextrinoid eller inamyloid - hvorav mer senere ....

Lysbilde - 1

Å lage lysbilder fra veldig tynne skiver av soppvev er vanskeligere, og du bør forvente flere feil enn suksesser. Vanskeligheten er å lage en veldig tynn og jevn skive som inneholder funksjonene du vil studere. På gjellene til en agarikoidart kan det være lurt å studere basidiene - de (vanligvis) klubbformede bindestrekene som sterigmata og sporer bæres på.

Når du har kuttet av en tynn skive ved hjelp av enten en skarp barberblad, eller revet av en stripe ved hjelp av et par nålenåtte pinsetter, er prosessen den samme som for sporesklier. Plasser prøven på et lysbilde, tilsett noen dråper flekk og deretter et dekkglass, og trykk lett for å flate delen. Vær forsiktig: de fleste dekkglass er tykkere enn en tidel millimeter, og de knekker veldig lett. Fjern overflødig flekk med et absorberende vev, og vent deretter noen minutter til flekken har gjennomsyret prøven.

Lysbilde - 2

En variant av denne tilnærmingen - ganske lettere, men mer av en hit and miss-teknikk - er å klemme et ganske tynt eksemplar mellom to lysbilder - med hell vil bitene du er interessert i spyle ut ved en av kantene. Bruk flekk som før for å markere disse kantfunksjonene.

Når du studerer basidiomyceter under et mikroskop, er du ikke begrenset til sporestørrelse og former. Du kan også undersøke ulike typer cystidia. Dette er bindestreker som skiller seg ut fra forskjellige overflater. Avhengig av hvor de forekommer, får de forskjellige navn: pleurocystidia forekommer på gjelleflater, cheilocystidia er de på gjellkantene, pileocystidia forekommer på hetteoverflaten, og caulocystidia er de som finnes på soppstammen. Formene på cystidia på hvert av disse stedene kan være forskjellige, og disse forskjellene kan hjelpe deg med å, skille ... forskjell mellom arter.

Gilletrama av Hygrocybe chlorophana

Fotomikrofotografiet vist ovenfor er av gjelletrama fra Hygrocybe chlorophana , Golden Waxcap. Ikke alle vokskapsler kan identifiseres til artsnivå ved å undersøke makroskopiske tegn. Noen bestemmes best ved å undersøke dem under et mikroskop, mens noen trenger både makroskopisk og mikroskopisk undersøkelse. Ved å klemme et lite stykke gjellemateriale (gill trama) mellom et lysbilde og dekkglass kan du studere vevets struktur. Noen har flettet hyfer; noen er vanlige (hyfer ligger parallelt med hverandre) og andre er subregulære (et sted mellom de to). De lange cellene av Hygrocybe chlorophana er tydelig synlige her, mens hyphcellene til for eksempel Hygrocybe miniata , Vermillion Waxcap) er mye kortere.

Programvare for å gjøre mikroskopfotografering mindre elendig

Hvis du noen gang har prøvd å ta et fotografi av sporer eller andre biter av soppvev under et mikroskop, vil du vite hvor vanskelig det er å få alt i fokus. Du får en del skarp og resten er uskarpt. Problemet skyldes den svært begrensede dybdeskarpheten som er tilgjengelig med høy forstørrelse. Spesialist, men billig programvare, kan komme deg til unnsetning. Du tar flere bilder med fokus på forskjellige dybder inn i vevsprøven, og programvaren konstruerer et bilde ved hjelp av delene i fokus på de forskjellige bildene dine. Måling av soppsporer blir mye enklere med et program som heter Mycocam4. Produsert av mykolog Richard Shotbolt, er den tilgjengelig som gratis nedlasting fra www.shotbolt.com - og den er veldig grei å bruke.

Mikroskopi er et spesialfag og ikke noe som alle soppinteresserte ønsker å engasjere seg i. For mye mer informasjon om dette emnet finnes det spesialtekster, og for hjelp til å velge og sette opp et mikroskop nettsteder til pålitelige uavhengige leverandører som Brunel Mikroskoper er et godt utgangspunkt. Det er vanligvis mulig å arrangere et besøk for å diskutere dine spesifikke behov og prøve noen få alternativer.

Eksempler

På mange av våre soppart-sider vil du se eksempler på sporefotografier tatt med et mikroskop med et digitalkameravedlegg. Se for eksempel Laccaria bicolor , som har interessante sporepynt. og Cuphophyllus pratensis , som har ellipsoid eller tåreformet til subglobose sporer.


Hvis du har funnet denne informasjonen nyttig, er vi sikre på at du også vil finne boka vår Fascinated by Fungi av Pat O'Reilly veldig nyttig. Forfatter-signerte hardback-eksemplarer til en spesiell rabattpris er tilgjengelig her ...

Andre naturbøker fra First Nature ...